苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理,以及这三者的作用是什么
苯酚,氯仿,异戊醇抽取DNA的原理反正是通过他们作为同分异构体的相似性质,通过有机溶剂没有办法分解。
他们反而可以使得存在于DNA的那些杂质,比如蛋白,多糖,酚类,被筛选掉。
它可以使蛋白质变性,并抑制降解,氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。,这三者的作用就是为了保护核酸不被破坏,同时能够排除掉dna以外的物质。
苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用苯酚抽提细胞DNA时,苯酚的作用是使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。
氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中)
用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?
因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。
另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
琼脂糖凝胶电泳时如果提取的DNA中含有蛋白质和RNA污染应如何解决
蛋白污染可以考虑用酚氯仿多抽提几次,记得吸上清的时候小心点,宁可浪费也别吸到界面。一般后续还需要用氯仿/异戊醇抽提来去除酚。这样基本蛋白污染就可以去干净。实在不行,抽提一次后,就用蛋白酶K消化30min,再抽提。 如果DNA多,RNA污染就添加RNase A消化,你可以中途取少量跑胶检测,RNA去干净了再抽提,再沉淀DNA。
ctab乳化方法
CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法:先将新鲜的叶片在液氮中研磨,破碎其细胞,然后加入CTAB分离缓冲液,将DNA溶解出来,再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质,最后得到DNA。
什么是ctab缓冲液
CTAB为十六烷基三甲基溴化铵, CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性; NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。
CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。 不知道对你有没有用处,建议你针对自己的问题,多查点资料。
到此,以上就是小编对于氯仿异戊醇碰到皮肤的问题就介绍到这了,希望介绍的4点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。
本站非盈利性质,与其它任何公司或商标无任何形式关联或合作。内容来源于互联网,如有冒犯请联系我们立删邮箱:83115484#qq.com,#换成@就是邮箱