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氯仿异戊醇怎么看是否坏了(分子生物学鉴定步骤)

豆角 2025-05-10 化学常识 23 views 0

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  1. 氯仿异戊醇别名
  2. 分子生物学鉴定步骤
  3. 氯仿溶于乙醇吗为什么
  4. 什么是ctab缓冲液

氯仿异戊醇别名

别名:苯酚-氯仿-异戊醇混合物

分子生物学鉴定步骤

首先你要提出细菌的DNA。方法如下:

氯仿异戊醇怎么看是否坏了(分子生物学鉴定步骤)

1、液体培养及保种:从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡(转速160r/min)培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中,再加甘油(30-40%)进行保种。(-80摄氏度保藏2年)

2、提取DNA(CTAB法): (1)取1.5ml菌液于1. 5ml离心管中,12000r/min离心2min,弃上清。 (2)向沉淀物中加入350ul双蒸水,重新悬浮沉淀。

(3)加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K(20mg/ml),溶菌酶3ul,混匀,于50℃温育1h。

(4)加入50ul 5mol/L NaCl溶液,充分混匀,再加入50ul CTAB/NaCl溶液,混合后再65℃温育30min。

氯仿异戊醇怎么看是否坏了(分子生物学鉴定步骤)

(5)冷却后加入等体积的酚(沉淀蛋白质):氯仿:异戊醇(增强酚的作用)(25:24:1),小心上下颠倒混匀,12000r/min离心5min,将上清液转移到新的EP管,重复此步骤2-3次,直至分层界面无白色沉淀。

(6)加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),小心颠倒混匀,12000r/min离心5min将上清液转移到新的EP管。(纯化作用)

(7)加入0.6倍体积的异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,12000r/min离心15min弃上清。

(8)向离心管中加入75%乙醇,12000r/min离心5min洗涤DNA沉淀,小心弃上清,重复洗涤1次,弃上清将离心管倒置于吸水纸上,晾干。

氯仿异戊醇怎么看是否坏了(分子生物学鉴定步骤)

(9)加入50ul(双蒸水)/ TE Buffer溶解DNA于4℃保存。

氯仿溶于乙醇吗为什么

氯仿:异戊醇=25:24:1在核酸抽提中用来除去蛋白和脂类物质,分液后水相(pH8.0,其中含核酸)在一定的离子强度下加入乙醇沉淀核酸,其中残留的有机溶剂会被乙醇带走。

酚抽提法得到的核酸质量能胜任大多数的分子生物学操作。在常用核酸分离方法中其核酸纯度仅次于氯化铯梯度离心法获得的核酸,比大多数的离子交换法得到的核酸质量要高。

非极性分子,不溶于极性溶剂.但考虑到乙醇的极性弱于水,所以推估氯气在乙醇中溶解度可能略大于水中.但要考虑到氯气可与水发生反应生成次氯酸和hcl(虽然进行的不完全),

氯气在碱存在的条件下,与乙醇反应,乙醇被氧化为乙醛,并可继续反应生成三氯乙醛和氯仿

什么是ctab缓冲液

CTAB为十六烷基三甲基溴化铵, CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性; NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。

CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。 不知道对你有没有用处,建议你针对自己的问题,多查点资料。

到此,以上就是小编对于氯仿异戊醇怎么看是否坏了呢的问题就介绍到这了,希望介绍的4点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。

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