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质粒胶图怎么看(质粒跑电泳为什么会有三条带)

豆角 2025-05-10 化学常识 19 views 0

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  1. 质粒跑胶为什么有三条带
  2. 质粒跑电泳为什么会有三条带
  3. 双酶切质粒后两条带分别是什么

质粒跑胶为什么有三条带

质粒跑胶是一种用于检测 DNA 片段的技术。在质粒跑胶中,DNA 片段被固定在凝胶中,并通过电场将其移动。通常情况下,质粒跑胶会出现三条带,这是因为在凝胶中存在着三种不同的 DNA 片段。

这两条带通常被称为“主带”和“副带”。主带通常包含最长的 DNA 片段,通常在 500-5000bp 之间。副带通常包含较短的 DNA 片段,通常在 100-500bp 之间。这些副带通常比主带更清晰,因为它们在更高的分辨率下更容易观察。

质粒胶图怎么看(质粒跑电泳为什么会有三条带)

为什么质粒跑胶会出现三条带呢?这是因为质粒本身是由两个不同的基因片段组成的。这两个基因片段通常被称为“外源片段”和“内源片段”。外源片段是从其他 DNA 分子中复制而来的,而内源片段则是质粒自己的 DNA 片段。

当质粒跑胶发生时,DNA 片段被固定在凝胶中,并通过电场将其移动。由于外源片段和内源片段具有不同的 DNA 结构和电泳速度,因此它们会在凝胶中移动到不同的区域。这就是为什么质粒跑胶会出现三条带的原因。

因为质粒是环形的DNA,稍有降解就会变成一条为线性,再厉害些,就成了线性DNA,三者在琼脂糖凝胶中速率不同,自然会出现三条带。

质粒跑电泳为什么会有三条带

  质粒DNA分子具有三种构型:共价闭合环DNA(cccDNA,SC构型)、开环DNA(OC构型)和线性分子(L构型)。在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的。在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁移率。其中跑在最前沿的是共价闭合DNA,其后依次是线性DNA和开环DNA,其原因是共价闭合的DNA其空间位阻最小,所以跑得最快。而开环DNA空间位阻最大,所以跑得最慢。  不过并不是每次提取的质粒都有三条带,两条带的情况也很多见,如你的空质粒。

质粒胶图怎么看(质粒跑电泳为什么会有三条带)

双酶切质粒后两条带分别是什么

质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的.

如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上酶切,再跑电泳的时候就出现了两条极近的带.

其实将这两条带回收(上面那条是目的条带的可能性要大些),进行连接,只要操作和实验条件好的话,菌落的阳性率也挺高的,因为是双酶切连接.

到此,以上就是小编对于质粒胶图有几条带的问题就介绍到这了,希望介绍的3点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。

质粒胶图怎么看(质粒跑电泳为什么会有三条带)

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