原生质体如何分离出DNA,醋酸钠回收dna

1. 原生质体如何分离出DNA
2. dna的沉淀纯化实验原理

原生质体如何分离出DNA

简单的讲法的话，就是要先将植物细胞的细胞壁用果胶酶和纤维素酶在0.5~0.6mol/L的甘露醇溶液中去除，然后将获得的原生质体破碎后高速离心，获得细胞核内的核酸，然后先用CATB方法去除蛋白质，也就是在保证核酸不被破坏的情况下用苯酚除去蛋白质，然后分液，弃掉有机相，然后加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀，待絮状物出现后，离心。弃上清液。

沉淀用75%乙醇洗涤，离心，弃上清液。

室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。

dna的沉淀纯化实验原理

在DNA 中，加入醋酸钠的作用就是促进DNA的沉淀。在质粒提取中，也要用到醋酸钠，是在中和液中(P3)，是为了中和碱裂解液。

3M的醋酸钠有H2O分子的作用，促进DNA沉淀，PH4.8的醋酸钠溶液降低了反应混合物中的pH值，起到中和作用，从而染色体DNA或质粒复性，并聚集成不可溶的网络状聚合物。

同时高浓度的醋酸钠亦会引起蛋白质-SDS复合物和高分子量的RNA分子发生沉淀。通过离心处理，便可把网络状的DNA聚合物同变性的蛋白质-DNA及RNA等以复合物形式沉淀出来，从而使.DNA得到纯化。

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