sds表面活性剂怎么配
实验材料
(一)试剂
1、30%丙烯酰胺混合液(Acr:Bis 为 29:1) 称取丙烯酰胺(Acr ) 29g 及甲叉丙烯酰胺(Bis ) 1.0g ,用 去离子水溶解并稀释至 100ml ,贮棕色瓶中于 4℃保存,可用一个月。
2、1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液 取 1mol/L HCL溶液 48ml 、三羟甲基甲烷(Tris ) 36.6g ,加双蒸馏水 至 80ml 使其溶解,调 pH 至 8.8,然后用双蒸馏水稀释至 100ml ,置棕色瓶中, 4℃贮存。
3、1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液 取 1mol/L HCL溶液 48ml , Tris5.98g , 加双蒸馏水至 80ml , 调 pH6.8, 用双蒸馏水稀释至 100ml ,置棕色瓶中, 4℃贮存。
10%sds表面活性剂的配法:一般SDS溶液是质量体积比(w/v),10%就是10克的SDS粉末溶解在水里,定容到100毫升。
十二烷基硫酸钠——Sodium dodecyl sulfate(SDS)是一种有机物,化学式为C12H25SO4Na,白色或淡黄色粉末,溶于水,对碱和硬水不敏感。具有去污、乳化和优异的发泡力,是一种对人体微毒的阴离子表面活性剂,其生物降解度>90%。
考马斯亮蓝r250与g250的区别
考马斯亮蓝R250 和G250在用途的区别:
1、考马斯亮蓝R250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合,染色灵敏度比氨基黑高5倍,适用于SDS电泳微量蛋白质染色。
2、考马斯亮蓝G250在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色,所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。 考马斯亮蓝R250 和G250其他的区别: 1、参数不同 考马斯亮蓝G250比考马斯亮蓝R-250多二个甲基。 2、染色灵敏度不同 考马斯亮蓝R250染色灵敏度比氨基黑高5倍。 考马斯亮蓝G250染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍。
g250染色液原理
G250染色液是一种常用的核酸染色剂,其原理是通过与DNA分子中的磷酸基团发生静电相互作用,从而使DNA分子呈现出深蓝色。G250染色液具有高亲和力和选择性,能够快速、可靠地染色DNA,使其在凝胶电泳等实验中可视化。此外,G250染色液还具有较好的稳定性和耐久性,适用于各种核酸分析和研究领域。
G250的染色原理为,通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的作用力、考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子。如磺酸基"、、“从而产生在膜_上或者胶上肉眼可见的蓝色。考马斯“亮"蓝有G250和R250两种。G 为Green、G250指 具有淡绿色调的蓝色染料,R为RedR250染料泛微红色调。考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析,考马斯亮蓝R250更多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色。
考马斯亮蓝的应用
考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue)一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。
考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
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