双缩脲试剂怎么配
双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液;双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液。
先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL,振荡均匀(营造碱性环境),再加入1~2滴双缩脲试剂B,振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。
具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。 它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。 双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。
当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。
可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。
向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。
酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。需要注意的是,能与双缩脲试剂发生紫色反应的化合物分子中至少含有两个肽键。因此,二肽无法用它来检验。
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