分离胶的不同浓度有什么区别,蛋白胶浓度怎么确定的

1. 分离胶的不同浓度有什么区别
2. PAGE中，分离胶和浓缩胶的浓度该怎么选择
3. 用考马斯亮蓝染蛋白胶方法

分离胶的不同浓度有什么区别

western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白

而因为western blot的膜应该是完全覆盖SDS PAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位置偏上活偏下

所以western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

PAGE中，分离胶和浓缩胶的浓度该怎么选择

聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：聚丙烯酰胺凝胶浓度/% 蛋白质分离范围/kd5 36—2007.5 24—20010 14—20012.5 14—10015 14—60浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。8KD的蛋白质可能就要用Tricine–SDS-PAGE系统，因为浓缩胶和分离胶浓度太大，电泳速度很忙，很可能引起电泳带弥散。

用考马斯亮蓝染蛋白胶方法

马斯亮蓝染色是用考马斯亮蓝进行蛋白质染色的方法。

1 电泳结束后， 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝 胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时 间。 注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚， 温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时 间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近， 在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4 个小 时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。

2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3 次。

3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。期间更换脱色液2-4 次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染 色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2 小时后即可出现。

考马斯亮蓝染蛋白胶（Coomassie Brilliant Blue staining）是一种常用的染色方法，用于检测蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中的分离和定量。以下是使用考马斯亮蓝染蛋白胶的步骤：

1. 将SDS-PAGE凝胶从电泳仪中取出。

2. 将凝胶置于染色盒中，加足够的染色溶液（通常是含有考马斯亮蓝染料的缩微粒溶液）覆盖凝胶，确保凝胶完全浸泡在染色溶液中。

3. 轻轻摇动染色盒，以确保染色溶液充分进入凝胶中，使其均匀染色。有时需要将染色盒放入摇床上进行摇动。

4. 在室温下静置染色，通常需要1-2小时，或者根据实验要求延长时间。5. 将染色溶液倒出，用去离子水轻轻冲洗凝胶，直到背景染色溶液变得清澈明亮。6. 用显微镜观察凝胶上的蛋白条带，如有需要，可以拍照记录。

7. 如果需要保存凝胶或进行进一步的定量分析，可以将凝胶转移到脱色溶液中，继续处理。

需要注意的是，考马斯亮蓝染蛋白胶是有毒的，应当遵守实验室的安全操作规程，并正确处置废液和废弃物。此外，为了提高染色效果和减少背景染色，可以优化染色条件，如染色时间、染色溶液浓度等。具体的操作方法和实验条件可以根据实验室的要求和实际情况进行调整。

到此，以上就是小编对于蛋白胶浓度怎么确定的的问题就介绍到这了，希望介绍的3点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。