浓缩胶里没加Tris会怎么样（4%浓缩胶的配制方法）

1. western上下层ph为什么不同
2. 4%浓缩胶的配制方法
3. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么浓缩胶和分离胶PH值不一样
4. 凝胶缓冲液和电泳缓冲液的区别

western上下层ph为什么不同

上层的浓缩胶用的是Tris-HCL缓冲液，PH6.8，HCL的解离度大，几乎全部成CL-，CL-在电场中移动最快。而电泳槽中含有甘氨酸，在PH6.8时只有少量解离，在电场中移动的最慢。蛋白质（被夹在中间）就在由快慢离子形成的电位梯度中被浓缩了。 下层的分离胶用的是Tris-甘氨酸缓冲液，PH8.8，在此PH下，甘氨酸解离度增大，泳动速度增加并超过了蛋白质，原先的电位梯度消失，大小形状不同的蛋白质在电场中分离。

4%浓缩胶的配制方法

1．1.5mo1／L Tris-HCl pH 8.8 (已加SDS )

2．0.5mo1／L Tris-HCl pH 6.8 (已加SDS)

3．10％SDS

4．30％Acr／Bis 29.2g Acr + 0.8gBis，用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放。

5．10％Ap (-20℃存放)

1．1.5mo1／L Tris-HCl pH 8.8 (已加SDS )

2．0.5mo1／L Tris-HCl pH 6.8 (已加SDS)

3．10％SDS

4．30％Acr／Bis 29.2g Acr + 0.8gBis，用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放。

5．10％Ap (-20℃存放)

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为什么浓缩胶和分离胶PH值不一样

分离胶是下层胶，其中的缓冲液为pH8.8的Tris-HCl。浓缩胶是上层胶，其中的缓冲液为pH6.8的Tris-HCl。电泳缓冲液为Tris、glycine和SDS配制，只要用规定质量的粉末配制，就不用调pH。

凝胶缓冲液和电泳缓冲液的区别

电泳缓冲液是Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样缓冲液是SDS缓冲液，需要加入Tris-Hcl，DTT，SDS，溴酚蓝和甘油。

分离胶配制过程中的缓冲液是PH8.8的Tris-Hcl。

浓缩胶配制过程中的缓冲液是PH6.8的Tris-Hcl。电泳缓冲液是加入电泳槽的，tris、甘氨酸缓冲液。

样品缓冲液就是loading buffer，处理蛋白样品的，分离胶缓冲液是配制分离胶的tris-hcl ph8.8。

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