怎样提取DNA
DNA提取的方法主要有两种:有机溶剂法和离心法
有机溶剂法是将细胞破碎,加入有机溶剂来分离DNA,然后用酒精沉淀纯化DNA
离心法是利用离心力来分离DNA和其他细胞成分,然后用酒精沉淀纯化DNA
DNA提取是分子生物学实验的基础,在遗传学、医学、生态学等领域得到广泛的应用
dna提取主要是CTAB方法,其它的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。
dna提取方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb。
二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)。
DNA提取是从细胞中分离和纯化DNA的过程。下面是一种常见的基本方法。
实验步骤:
1. 从含有DNA的样本(比如血液、细菌、植物等)中采集细胞并将其释放到一个离心管中。
2. 加入细胞裂解液,用来破坏细胞壁和细胞膜,释放出细胞内的DNA。
3. 加入蛋白酶,将细胞内的蛋白质降解掉。通常使用丝氨酸蛋白酶或蛋白酶K。
DNA的提取方法有7种:酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则
1、保证核酸一级结构的完整性;
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;
DNA提取依据实验需求和目的不同,方法也各异,通常需要耗费一定时间
提取DNA涉及到细胞裂解、纯化、定量等步骤,操作相对复杂,需要一定专业技能和实验条件
从模板样品中提取高质量的DNA对许多分子生物学的实验是非常关键的,所以我们需要花费时间和精力去完成DNA提取过程
磁珠法核酸提取的磁珠法核酸提取原理
磁珠法核酸提取原理; 依据与硅胶膜离心柱相同的原理,运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。
该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的DNA和RNA分离出来,可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。磁珠法核酸提取过程 磁珠法核酸提取一般可以分为四步:裂解——结合——洗涤——洗脱。磁珠法核酸提取过程:1、裂解取抗凝全血到1.5mLEP管中,加入BufferA、BufferB,混合均匀。然后把EP管置于恒温水箱中温育15~20min。
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