请教，ELISA中的棋盘滴定法，谢谢，急用
这是我做双抗体夹心ELISA时设计的方案，你可以参考一下。
棋盘滴定法选择抗体的最适工作浓度 a) 用包被缓冲液稀释单克隆抗体，浓度分别为10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、1.0ug/ml, 包被酶标板，每一浓度包被三个纵行，每孔100ul，每孔均作复孔。4 ℃过夜，PBST洗涤3次； b) 5%脱脂奶粉封闭酶标板， 37℃孵育1h，洗涤3次； c) 在横行包被孔中依次加入空白对照，阴性对照血清，弱阳性抗原液及强阳性抗原液，各100ul,37℃孵育1h，洗涤3次； d) 在每一包被浓度的一个纵行中分别加入按1:2000、1：5000、1：10000 稀释的多抗， 37℃孵育1h，洗涤3次； e) 在每一包被浓度的一个纵行中分别加入HRP标记IgG抗体，稀释度先按说明书上的，37℃孵育1h，洗涤3次； f) 加TMB底物，37℃避光显色10-15min，用2mol/L H2SO4终止反应，酶标仪450nm读取吸光度（OD）值； g) 测得的强阳性抗原液OD值在1.0左右，阴性对照OD值小于0.1的组合为较理想的组合。可根据初步确定的浓度缩小间距,再做进一步棋盘滴定,寻找最佳包被条件。抗体做稀释时最好用同一个原始浓度做倍比稀释，这样可以尽量减少由于加样枪造成的误差及人为误差。tcfh是什么试剂
人总胆固醇试剂的简称。
人总胆固醇(TC)Elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定样品指标水平。样品包括血清血浆尿液脑脊液细胞固体组织等，用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样品，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中浓度，或者与CUTOFF值相比较，从而判定标本阴阳性。
igm检测原理
采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒lgM抗体(HCMV-IgM),微孔中预包被鼠抗人-IgM (u链)首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份(包括特异的IgG抗体)将被洗涤除去;第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶(HRP) 标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。
被捕获的IgM中的HCMV-lgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。
通过酶标仪检测吸光度(A值)从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。
elisa试剂中tmb是什么意思
TMB如下：
1、 尿联试纸的配制
2、 肝炎的检测3、 妊娠检测试验 4、 血液和尿液中葡萄糖、血红蛋白、白蛋白的快速测定5、 粪便隐血实验 6、 血液中粒细胞值的检测7、 类固醇、性激素的检测 8、 酶活性的测定9、 抗原、抗体及遗传物质的分析、检测10、 唾液中酒精的快速测定11、 生物样品的染色12、 水质检测、指纹呈现检测 13、艾滋病的检测14、ELISA试剂盒底物
到此，以上就是小编对于tmb底物溶液的问题就介绍到这了，希望介绍的4点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。
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