tae制胶步骤
1,制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2,胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板。取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子。将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子,将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
3,室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.
求!琼脂糖凝胶电泳中凝胶的配方
电泳缓冲液一般是1×TAE或者0.5×TBE TAE一般配制成50×的储存液 组分浓度2M Tris-醋酸,100mM EDTA 配制方法:
1。称量Tris 242g,Na2EDTA·2H2O 37.2g于1L烧杯中;
2。向烧杯中加入约800ml去离子水,充分搅拌均匀;
3。加入57.1ml的冰醋酸,充分溶解;
4。加去离子水定容至1L后,室温保存。 TBE一般配制成10×的储存液 组分浓度890mM Tris-硼酸,20mM EDTA 配制方法:
1。称量Tris 108g,Na2EDTA·2H2O 7.44g,硼酸 55g于1L烧杯中;
2。向烧杯中加入约800ml去离子水,充分搅拌均匀;
3。加去离子水定容至1L后,室温保存。
tae的化学组分和用途
TAE缓冲液是由三羟甲基氨基甲烷(Tris base)、乙酸(acetic acid)和乙二胺四乙酸(EDTA)组成的缓冲液,英文名为三种组成成分的首字母。在分子生物学实验中常被用作DNA或RNA进行凝胶电泳时的缓冲液。缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应(4OH-4e=2H2O+O2),负极发生的是还原反应(4H+4e=2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
基本信息
中文名TAE缓冲液别名TAE Buffer氧化反应(4OH--4e-=2H2O+O2)
TAE 是由试剂:Tris(121.14)、乙酸(60.05)、EDTA(292.25)、 EDTA-Na2(336.21) 、Na2EDTA· 2H2O (372.21)组成的。
使用用途: 生物制药,体外诊断,个人护理及化妆品原料等 保存温度: 常温密封避光保存 性质描述:白色结晶或粉末。 TAE 是应用较为广泛的核酸电泳缓冲液,主要用于 DNA 琼脂糖凝胶电泳。使用 TAE 做 为电泳缓冲液,电泳时双链线状 DNA 的迁移率较快
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