酚试剂使用方法
酚试剂学名为3一甲基苯并噻唑酮腙盐酸盐(MBTH)。该法原理是甲醛与酚试剂反应生成嗪,嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物,.摩尔吸光系数为7.0×104L.mol-1cm-1。本法测定范围为0.02-0.3 mg/L。此法灵敏度高,操作简便,但易受其它醛的干扰。在溶液中存在二氧化硫时会使结果偏低,对于空气来说可将气样通过硫酸锰滤纸过滤予以排除。样品的加标回收率为93%一101%[2]。夏钦等人[3]在测定丁炔二醇中的微量甲醛,用酚试剂和甲醛反应分光测得其摩尔吸光系数为5.17 ×104L.mol-1.cm -1,其检测限为4.8 mg/L,回收率大于99%,相对标准偏差小于3%,在甲醛浓度为0-1.4 mg/L范围内符合比耳定律,具有灵敏度高,准确等特点。甲醛与酚试剂反应历程如下:
(1)称取牧草饲料粉碎,放入烧瓶中,加入氢氧化钠溶液,放入60℃的水浴中5h进行反 应,取出摇匀,加入蒸馏水稀释40倍,离心5min,静置;
(2)取上清液放入试管中,加入酚试剂甲液,混合均匀,于38℃恒温水浴中放置20min;再加入酚试剂乙液,立即振荡混合均匀,在38℃恒温水浴中保温30min,用1cm光径比色皿在750nm波长下测定吸光度,并根据测定结果与标准曲线对比得到样品蛋白质含量。
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