转染,后用荧光显微镜观察细胞是否有荧光出现,在
我最近常做这个实验,GFP也在N端,与目的蛋白融合表达,我对COS-1转染该融合片段的感想总结如下:
1)转染细胞状态一定要好,这是成败的关键。
我选择的是早晨消化COS,分瓶密度高,下午即在60%满时,就转染1-2ugDNA,6hr换液用低血清(1%FBS)DMEM维持2)GFP-目的蛋白由于CMV启动子问题,表达效率太高,对细胞的正常状态不利,尤其是细胞状态不好的细胞。
所以常有细胞漂浮起来、凋亡的现象,看荧光时,可以将细胞上清洗涤后观察。
3)根据不同蛋白的性质决定的,有的蛋白具有NES、NLS或跨膜区、信号肽等功能性序列,可能将GFP带到胞外4)细胞的性质决定GFP位置:如COS细胞,常形成液泡,占据大量胞浆,GFP有时会沿着这种胞液分布,要选择高倍镜观察5)观察要仔细,选择可见光和高倍数荧光看祝您成功!
流式细胞仪细胞凋亡的结果怎么分析
如果是实验的话可以用PI等专门染活细胞或死细胞的染料进行染色,再用荧光显微镜或者流式细胞仪测量,原理一般是细胞膜的渗透性(比如死细胞一般细胞膜很通透,PI就会透过进行染色,活细胞则不会)。还有其他的一些染料则是测细胞凋亡的标志物(比如caspase含量)。
如果是只能在显微镜下观察判断的话,对于贴壁的细胞可以观察它是否贴壁以及它的形态(比如凋亡会有起泡,blob),但是这种方法非常不准确。。
到此,以上就是小编对于绿色荧光怎么看凋亡了没的问题就介绍到这了,希望介绍的2点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。
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