标准蛋白质溶液怎么配（蛋白浓度的计算公式）

1. bsa标准液配置
2. 蛋白浓度的计算公式
3. 检测蛋白质需要用到什么试剂

bsa标准液配置

用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。

如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。

蛋白浓度的计算公式

最开始的浓度假设是xug/mL

那么取了1ml蛋白质溶液，稀释到了100ml，则浓度为x/100

ug/mL

再取0.6mL,加入0.4ml蒸馏水和5ml考马斯后，浓度为x/100

*0.6/6

故x/100

*0.6/6

=12.777

那么x=12.777*100*6/0.6ug/mL

检测蛋白质需要用到什么试剂

需要用到双缩脲试剂。

双缩脲试剂。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。

可以通过双缩脲法进行检测。具体如下：

1.先取12支试管分为2组，分别在试管中加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升不等量的标准蛋白质溶液。再用水加入其中至1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。

2.将试管内的溶液充分摇匀后，静置于20-25℃的室温下30分钟。再于波长540NM处进行测定各管吸光度值对比。

3.用没有加蛋白质溶液的试管作为空白对照液，再取两组测定的平均数值，以蛋白质含量为横坐标，以光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。

4.取2～3个试管，重复相同方法，测定样品中蛋白质浓度。

检测蛋白质的方法有很多，使用的试剂也不尽相同。以下是几种检测蛋白质常用的试剂和方法：

1. Bradford试剂：一种用于测定蛋白质浓度的染色试剂，可以与蛋白质发生化学反应，产生变色。通常用于比色法测定蛋白质浓度。

2. BCA试剂：一种通过化学反应测定蛋白质浓度的试剂。BCA试剂的原理是：试剂中的铜离子（Cu2+）在碱性条件下与蛋白质中的蛋白质酰基（主要是赖氨酸和组氨酸）反应形成复合物，从而变色。通常也用于比色法测定蛋白质浓度。

3. Western blotting：一种检测特定蛋白质的方法。Western blotting将蛋白质分离并转移到膜上，然后用可以识别目标蛋白质的抗体和检测试剂进行染色检测。

4. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：通过电泳将蛋白质分离，可根据不同的分子量将蛋白质分成不同的带，用于检测多种蛋白质的含量和分子量。常用的染色试剂包括银染法、Coomassie Brilliant Blue染色等。

1.凯氏定氮法：其是一种测定总氮含量的方法，可以在混合物或化合物中检测。即在催化剂条件下，用浓硫酸消化标本，将标本中的有机氮转化为无机铵盐，然后在碱性环境下将无机铵盐转化为氨，用蒸汽蒸馏吸收硼酸溶液，然后用标准盐酸滴定，计算氮含量。

2.双缩脲法：这是一种用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂呈蓝色，是一种碱性含铜测试溶液，它由几滴1%硫酸铜，1%氢氧化钾和酒石酸钾钠制成。

检测蛋白质常用的试剂包括：

1. Bradford试剂：基于蛋白质与染料结合而测定蛋白质浓度

2. BCA试剂：将蛋白质还原为与试剂反应的Cu+离子，进而得出蛋白质浓度

3. Lowry试剂：基于蛋白质-铜络合物与碱性淀粉胺产生的比色反应进行测定

4. Ninhydrin试剂：可用于检测游离氨基酸或蛋白质，基于氨基酸与试剂之间的紫色原理

到此，以上就是小编对于标准蛋白质溶液怎么配置的问题就介绍到这了，希望介绍的3点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。