怎么算分离胶浓度（怎么算分离胶浓度大小）

1. 5%分离胶如何配制
2. 分离胶与浓缩胶的成分区别
3. 怎么确定胶回收的DNA的浓度
4. 不同浓度的胶怎么选择

5%分离胶如何配制

一般我们采用1mm厚的玻璃板制胶，将玻板固定好确认其密封，配制分离胶（也叫下层胶）约5ml，缓缓注入玻板中，然后覆盖一水层，室温静置15～20min待胶凝固；去除水层，配制浓缩胶（也叫上层胶）约2ml，最后插上1mm的梳子，室温静置20min左右。在这里值得注意的是，分离胶浓度的选择与蛋白分子量大小、目的蛋白分子量等因素密切相关。同一条件下，胶浓度越高，所需电泳时间越长。蛋白分子量小的蛋白，通常胶浓度选大一些，反之亦然。如果实验之前无法准确判断胶浓度如何选择，可以先用10％或12％的胶先做一次预实验，后续再根据实际情况优化实验条件。

配制15ml 5%的分离胶：30% Acr-Bis (29:1)-2.5ml；H2O-8.4ml；1.5M Tris-HCl（ pH8.8）-3.8ml；10%SDS-150ul；10%过硫酸铵-150ul；TMED-8-15ul

浓缩胶一般是5％的浓度，不做其他浓度的调试。

分离胶与浓缩胶的成分区别

1、性质不同

浓缩胶：在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中，同一介质的凝胶浓度分为 两种，负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。

分离胶：不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分，其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。

2、过程不同

浓缩胶过程：由于浓缩胶浓度低、孔径大，分离胶浓度高，孔径小。带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时，阻力小，运动速度快。当接近小孔径凝胶时，阻力较大，移动速度减慢，使样品浓缩，形成窄带，减少电泳过程中的带扩散。

怎么确定胶回收的DNA的浓度

根据你扩增的产物情况选择合适分辨率的凝胶浓度，比如：如果你的条带离引物二聚体很远，且比较单一，那可用1%~1.5%的胶即可，可稍微制厚一点，方便点样；如果你的条带只有一两百即离引物二聚体很紧或者非目标条带很多，那你需要浓度稍大一点的胶（3%~5%），电泳时间长一点，这样可使你的目的条带与非目的条带分开，方便切胶。

胶制好后即可点样，一般会使用宽一点的梳子可使上样量加大，提高回收浓度。

点完样后即可开始电泳，电泳结束后，在紫外光仪下条带可显示出来，用薄的锋利的刀片快速将目标条带切下，切胶时要注意：尽量把目标条带切下，尽量包含较少的琼脂糖胶，并切忌将非目的条带切下，还要注意尽量让紫外线照射时间短（因为紫外照射会发生核苷酸变异，产生TT二聚体）。

目标条带切下后，可使用专门的琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（很多公司都有），按照试剂盒的说明书即可回收其中的DNA。希望能帮到你，祝顺利！

不同浓度的胶怎么选择

western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白

而因为western blot的膜应该是完全覆盖SDS PAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位置偏上活偏下

所以western blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量

到此，以上就是小编对于怎么算分离胶浓度大小的问题就介绍到这了，希望介绍的4点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。