为什么分离rna比较简单,异丙醇溶液怎么回收的

1. 为什么分离rna比较简单
2. RNA的提取方法步骤及原理

为什么分离rna比较简单

RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。

外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。

针对它们我们应该戴帽子，口罩，橡胶无菌手套，在清洁灰尘少的地方提取RNA。我上面说了内源性RNAase污染才是关键，所以有些同志没有注意这些对外源性RNAase的防护RNA也提取的很出色。

但是如果你运气不太好的话外源性RNAase污染影响很大的。

总RNA分离的方法很多，常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase 抑制剂来抑制RNase的活性，同时，异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠（sarcosyl）共同作用可以破坏核蛋白复合体，使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。

由于RNA在碱性条件下不稳定，因而在整个提取过程中体系始终保持酸性至中性，而在酸性条件下DNA极少发生解离，DNA同蛋白质一起变性后被离心下来，RNA则仍溶于上清缓冲液中，最后用异丙醇沉淀出RNA。

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

RNA的提取方法步骤及原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

RNA提取的一般步骤包括样本处理、裂解、去除DNA和蛋白质、纯化和评估等。

以下是一般提取RNA的步骤：

1.采集样品。RNA可以从各种生物学样品中获得。

2.裂解。样品裂解以释放RNA。裂解剂可以是化学品，物理方法（例如超声波处理，珠研磨器），或酵素。RNA的有效裂解通常是RNA提取的最重要步骤之一。

3.去除DNA和蛋白质。在纯化RNA之前，必须从RNA中去除DNA和多余的蛋白质。去除DNA的步骤包括DNase处理，或用nuclease-free Buffer洗涤。去除蛋白质的步骤包括用酸性Buffer洗涤、钠离子膨胀液(低pH)洗脱或亚硫酸钠脱细胞质净化。

4.纯化RNA。RNA可以通过凝胶过滤，离心或离子交换纯化方法纯化。

5.评估 RNA 。纯化的RNA可以用吸光光度计或电泳进行测量。吸光光度法超过260纳米的RNA的吸收峰，而RNA的260纳米吸收与RNA含量成正比。用电泳分析可以确定RNA的大小、完整性和纯度。

RNA提取的原理：

RNA分子本身比DNA分子更易于降解或附着到其他生物分子或表面。因此，在提取RNA时必须谨慎地处理，以避免RNA的降解或沉淀。RNA提取需要裂解样品细胞或组织细胞，以使RNA完全裸露。裂解的样品要通过不变质和造成RNA的毁坏的最少化。裂解的样品中还可能会存在其他核酸，如DNA，RNA二聚体，RNA三聚体、RNA蛋白复合物。通过添加洗脱剂、上样前预浸的亲疏水性列上进行分离。最后，纯化的RNA需要评估RNA的大小、完整性和纯度。

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