酚试剂使用方法,甲酚的测定

1. 酚试剂使用方法
2. Folin-酚法测蛋白质的原理和操作
3. folin酚试剂法测定蛋白质含量所用器材有哪些
4. 酚试剂的溶解度

酚试剂使用方法

（1）称取牧草饲料粉碎，放入烧瓶中，加入氢氧化钠溶液，放入60℃的水浴中5h进行反 应，取出摇匀，加入蒸馏水稀释40倍，离心5min，静置；

（2）取上清液放入试管中，加入酚试剂甲液，混合均匀，于38℃恒温水浴中放置20min；再加入酚试剂乙液，立即振荡混合均匀，在38℃恒温水浴中保温30min，用1cm光径比色皿在750nm波长下测定吸光度，并根据测定结果与标准曲线对比得到样品蛋白质含量。

酚试剂学名为3一甲基苯并噻唑酮腙盐酸盐(MBTH)。该法原理是甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，.摩尔吸光系数为7.0×104L.mol-1cm-1。本法测定范围为0.02-0.3 mg/L。此法灵敏度高，操作简便，但易受其它醛的干扰。在溶液中存在二氧化硫时会使结果偏低，对于空气来说可将气样通过硫酸锰滤纸过滤予以排除。样品的加标回收率为93%一101%[2]。夏钦等人[3]在测定丁炔二醇中的微量甲醛，用酚试剂和甲醛反应分光测得其摩尔吸光系数为5.17 ×104L.mol-1.cm -1，其检测限为4.8 mg/L，回收率大于99%，相对标准偏差小于3%，在甲醛浓度为0-1.4 mg/L范围内符合比耳定律，具有灵敏度高，准确等特点。甲醛与酚试剂反应历程如下:

Folin-酚法测蛋白质的原理和操作

Folin-酚法蛋白定量包括两步反应:第一步生成蛋白质一铜络合物; 第二步是酚基将磷钥酸、磷钨酸试剂还原. 试剂甲由A(4%碳酸钠溶液与0.2mol/L氢氧化钠溶液等体积混合)和B(1%硫酸铜溶液与2%的酒石酸钾钠溶液等体积混合)两种溶液组成.你说的加了甲后10min再加乙,因为第一步反应肯定要时间的,试剂甲当然不能省了,其他的不说,它最起码提供了碱性的反应条件,Folin-酚法测定蛋白酶活力的原理是蛋白酶水解酪蛋白产生Tyr, 在碱性条件下，Tyr与Folin试剂反应生产蓝色物质，于680nm比色测定光吸收值，计算酶活力。

要绘制 Tyr标准曲线,这两个共同的步骤是第二步显色反应.

folin酚试剂法测定蛋白质含量所用器材有哪些

仪器有分光光度计 台式离心机 精密天平 三角瓶 烧杯 量筒 移液器

Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。

此法的显色原理与双缩脲法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。

酚试剂的溶解度

酚试剂是利用光度法测定脂肪醛（aliphatic aldehydes）的试剂；测定粘多糖（glycosaminoglycans）中的己糖胺（hexosamines），光度测定环境样品中的痕量硒。空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物。根据颜色深浅，比色定量。

很显然，酚试剂是没有固定溶解度的。

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