怎么配置ttc溶液（ttc标准曲线计算）

1. ttc溶液配制方法
2. ttc标准曲线计算
3. ttc法的优缺点

ttc溶液配制方法

2％TTC溶液配制方法：

实验试剂：磷酸缓冲盐溶液（PBS），红四氮唑粉末（TTC）

配制流程：称取TTC粉末6克溶于300毫升PBS溶液中。

注意事项：溶液需4℃避光保存。

TTC溶液的配制方法如下：

取3克TTC溶于升蒸馏水或冷开水中，配制成浓度为百分之0.1的TTC溶液。

药液酸碱度应在6、5至7、5。

具体步骤是：

1、将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水浸泡2至6小时，使种子充分吸胀。

2、随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3、把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。

4、放入30至35度的恒温箱内保温30分钟。也可在20℃左右的室温下放置40至60分钟。

5、保温后，倾出药液，用自来水冲洗2至3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力即可。

ttc标准曲线计算

A=0.00142×C （R^2=0.99960,A为吸光度,C为TTC浓度μg/L）,这是用硫代硫酸钠与TTC标准溶液反应得出来的回归曲线。

TTC标准曲线的制作取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大试管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 μg。分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线

种子活力:

标准曲线的配制在容器瓶中配0.1％TTC母液（即1000μg/ml）。取5ml容量瓶5只，每只瓶中加入极少量（粒数）的强还原剂连二亚硫酸钠（Na2S2O4），以便将四唑还原成红色的TTF，用微量注射器分别加入0.1％TTC溶液25、50、75、100、150μl，并加入定容，摇匀，配制成每毫升含有5、10、15、20、30μg的标准溶液。在490nm波长的72－1型分光光度计下，分别测定其光密度，并绘出标准曲线图。

A=0.00142×C （R^2=0.99960，A为吸光度，C为TTC浓度μg/L），这是用硫代硫酸钠与TTC标准溶液反应得出来的回归曲线。

ttc法的优缺点

TTC法（Time to Contact）是一种用于目标跟踪和碰撞避免的方法，其中时间间隔和物体的视角变化用于计算目标与观察者之间的距离和速度。

TTC法的优点包括简单、实时性好和对目标速度变化的敏感性高。然而，TTC法也存在一些缺点，如对观察者视角和目标运动模型的假设，以及局限于近距离和相对较低速度的限制。在具体应用时，需要结合实际需求和场景，考虑使用其他方法来综合分析和预测目标运动。

TTC法，为目前国际上公认的较好的测定种子生活力的方法，其原理为氧化态的无色的氯化三苯基四氮唑接受了活种子呼吸过程中脱氢酶产生的氢，而变成红色的还原态物质。

有生活力的种子其脱氢酶的活性往往高，四唑接受氢离子还原为红色，而死组织不着色，故根据染色部位及染色深浅可以判断种子的生活力。

红四氮唑为白色或淡黄色的有毒粉末，宜放在暗处低温下保存。

用蒸馏水配成0.1%～1%浓度的溶液，用稀碱调pH至中性（如用0.05～0.1摩尔/升，pH7.5的磷酸缓冲液配制，调pH至6.8～7.2，效果更好）。用棕色瓶放冰箱中保存备用。

供试种子先浸泡16～24小时，然后沿种脊小心地将种子切成两瓣，放烧杯或培养皿内，切面朝下，滴入四唑溶液浸没剖面，放25～30C温箱内经8～24小时后取出冲洗净，观察染色反应，温度越高，染色越快。

如放在室温下需遮光，因四唑溶液对光敏感。

有生活力的种子胚染成红色，无生活力种子则不染色或仅有浅红斑点。

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