VRBA琼脂冷却没有凝固怎么办（琼脂冷凝温度）

1. vrba琼脂培养基的配制和灭菌
2. vrba可以生长什么菌
3. 大肠菌群的计算方法举例说明

vrba琼脂培养基的配制和灭菌

结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）培养基为选择性计数固体培养基，主要用于大肠菌群平板计数检验。该培养基的配制及使用方法为：称取本品 41.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,煮沸不要超过2 分钟。取适宜稀释度样品液 1ml，加入到无菌平皿中心，将冷至 45℃ ± 0.5℃ 的 VRBA 10-15ml倾注于平皿中。小心旋转平皿将培养基与样液充分混匀。凝固后，再加3-4ml VRBA 覆盖平板表层 ，翻转平板，置于36 ± 1℃培养 18-24 小时。无需高压灭菌。临用时制备，不得超过3小时。

VRBA的使用方法与其他培养基的不同之处在于：1、无需高压灭菌，煮沸不超过2分钟，必须现用现配。2、该培养基在倾注第一层凝固之后需要再用VRBA覆盖一层，然后再进行培养。

      为什么每个平板上均要倾倒两次结晶紫中性红胆盐培养基？主要是为了防止表面有迁徙性细菌生长，因为一旦有迁徙性菌落生长蔓延，那这块平板就很难能够清楚的计数了。再倒一次琼脂把可能存在的迁徙性菌落封在琼脂内，让其不能蔓延开来,这样就不会对结果观察造成影响了。所以再次倾倒可以防止菌落蔓延导致无法计数的现象发生。

vrba可以生长什么菌

大肠菌群

培养基含有营养成分、选择性抑菌剂、指示剂和冷水可溶性凝胶。营养成分提供大肠菌群生长所需营养；选择性抑制剂可有效抑制其他细菌的生长；大肠菌群生长繁殖分解乳糖产酸菌落周围培养基变为红色。冷水可溶性凝胶替代琼脂起凝固剂作用，不必加热。培养基经射线灭菌，可直接使用。

大肠菌群。

VRBA即结晶紫中性红胆盐琼脂。

是鉴别培养基，用于大肠菌群的固体平板检测  。

培养基无需高压灭菌，只需煮沸至完全溶解即可。

培养皿及其他一切接触到培养基的工器具都要灭菌。

产品用法：无需高压灭菌。临用时制备,不得超过3小时。

大肠菌群的计算方法举例说明

平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。但大肠菌群多少算是含量较高呢?国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g(mL)为界，超过这个含量一般认为是含量较高。

但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g(mL)，那必须选用平板计数法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。

培养基的要求

平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。特别指出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。

大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。

另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。

稀释度的确定

国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。什么样的稀释度是合适的呢？这要根据计数来决定。计数环节要求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板进行计数，因此培养后菌落数在这个范围内的稀释度就是适宜的稀释度。

实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员可以预计的，但是对盲样，我们能做的只有根据实际情况多检测几个稀释度了。这里需要提一句，液体样品的检测稀释度可以包括原液。

证实试验

到此，以上就是小编对于琼脂冷凝温度的问题就介绍到这了，希望介绍的3点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。