c18柱色谱原理,c18反相柱怎么清洗

1. c18柱色谱原理
2. 依利特c18色谱柱说明书

c18柱色谱原理

C18柱属于反相色谱柱，利用极性相反的固定相（C18硅胶）与待测样品中相互作用的极性不同分离成分的一种柱。

反相色谱（RP-HPLC）是一种将样品分离和分析的方法，是一种常用的高效液相色谱法。其基本原理是利用反相柱（如C18柱）中的长链烷基基团（如C18硅胶）与待测样品中的分子间的水相相互作用，通过流动相中有机溶剂浓度的逐步增加使样品中的成份在某一时间逐渐溶解出来。

当样品通过C18柱时，不同部分之间的亲疏性差异将影响其在柱中的速率。在极性相反的柱床介质中，极性较弱的成分将移动得更快，而极性较强的成分则移动得更慢。由于C18柱中的长链烷基基团具有极性，它吸附样品中比较疏水的成分，而不被极性较强的成分所吸附，因此，比较疏水的成分将会在柱中停留更长的时间，产生较强的保留作用，极性较强的物质则会更快地流过柱床而分离出来。

总之，C18柱是一种常用的反相色谱柱，它利用长链烷基基团与待测样品中的分子间的水相相互作用使成分分离，适用于分离较疏水的有机分子和高分子化合物。

1. C18柱色谱原理是利用C18柱填充物的亲脂性质，将待测物样品在柱上进行分离。
2. C18柱填充物是一种疏水性的固体颗粒，其表面具有大量的疏水基团，可以与待测物中的疏水性分子发生相互作用，从而实现分离。
在柱中加入有机溶剂，可以进一步增强柱填充物与待测物之间的相互作用，提高分离效果。
3. C18柱色谱在生物医药、环境监测、食品安全等领域有广泛的应用，可以用于分离和纯化化合物，检测分子结构和含量等。

依利特c18色谱柱说明书

色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。

（2）流动相： 流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。

（3）样品： 样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。

2、色谱柱的保存

（1）反相色谱柱每天实验后的保养： 使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

（2）长期保存色谱柱： 如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。

3、色谱柱的再生 因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降

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