凝胶过滤硫酸铵原理
凝胶过滤硫酸铵是将盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中含有硫酸铵等盐类,进行解析,具体步骤是:
凝胶平衡后,用皮头滴管除去凝胶柱面的溶液,将盐析所得全部IgG样品加到凝胶柱表面,打开柱下口,控制流速让IgG样品溶液慢慢浸入凝胶内。凝胶柱面上加一层的0.0175mol/L,pH6.7磷酸盐缓冲液,并用此缓冲液洗脱,控制流速为0.5ml/min左右。用试管收集洗脱液,每管10滴。
取出1滴溶液置于黑色比色磁盘中,加入1滴20%磺基水杨酸,若呈现白色絮状沉淀即证明已有蛋白质出现,直到检查不出白色沉淀时,停止收集洗脱液。
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