牛骨染色怎么染通透,免疫染色通透液怎么用的

1. 牛骨染色怎么染通透
2. tunnel染色方法

牛骨染色怎么染通透

白糖上色法:

先用火把白糖熬焦，颜色可以自己控制，熬到什么程度可以根据你做旧需要的程度来控制时间，建议颜色深点。这就是染色的颜料块了

染色的调和液分2种，一是颜色清淡的油，比如橄榄油等的植物油。二就是水，水比较好控制，添加制作好的颜料块把水烧开（烧开颜色调匀就可以不要一直烧），把骨头扔进去泡，骨头的颜色深浅自己用水多少与泡的时间来控制。染好等干后如果不着急就涂抹橄榄油自己慢慢盘，如果想马上出效果就你可以布轮涂抹抛光油或者抛光腊泡光。

tunnel染色方法

1.常规方法制作石蜡切片，用二甲苯浸洗2次，每次5min;

2.用梯度乙醇(100、95、90、80、70%)各浸洗1次，每次3min;

3.PBS漂洗2次用ProteinaseK工作液(20ug/ml)处理组织15-30min在21-37°C(温度、时间、浓度均需摸索)或者加细胞通透液8min;

4.加入含2%过氧化氙的PBS，室温反应5min，PBS漂洗2次

5.制备TUNEL反应混合液，处理组用50ulTdT450ul荧光素标计的dUTP液混匀:而阴性对照

组仅加50ul荧光素标记的dUTP液，阳性对照组先加入100ulDNase1，反应在15~25℃x10min，后面步骤同处理组。

6,玻片干后，用滤纸小心吸去切片周围多余液体，加50ulTUNEL反应混合液(阴性对照组仅加50ul荧光素标记的dUTP液)于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃*1h。

7.加入到已预热37℃的洗涤与终止反应缓冲液，37℃保温30min，PBS漂洗3次;

8,可以加1滴PBS在荧光昂微镜下计数凋广细胞(激发光波长为450~500nm，检测波长头

515~565nm);

   Tunnel staining法是一种染色方法，它可以用于显示核仁的细胞结构。它的工作原理是将核仁的蛋白质染色，然后将其固定在样本上，再将其通过电子显微镜观察，从而获得核仁细胞结构的详细图像。

tunnel 的凋亡染色并不是专门去染细胞核，但它可以使细胞核着色。 TUNEL全名为terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling汉语为：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。原理：细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3’末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’末端，从而可进行凋亡细胞的检测。

由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3’末端形成，很少能够被染色。

TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用.

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