苯酚和氯仿反应机理
苯酚、氯仿、异戊醇抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用苯酚抽提细胞 DNA 时,苯酚的作用是使蛋白质变性,同时抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与 DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而 DNA 溶于水相。
氯仿的作用是克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。 (酚易溶于氯仿中)
用酚-氯仿抽提细胞基因组 DNA 时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?因为异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡 产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含 DNA 的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
氯仿异戊醇别名
别名:苯酚-氯仿-异戊醇混合物
氯仿溶于乙醇吗为什么
非极性分子,不溶于极性溶剂.但考虑到乙醇的极性弱于水,所以推估氯气在乙醇中溶解度可能略大于水中.但要考虑到氯气可与水发生反应生成次氯酸和hcl(虽然进行的不完全),
氯气在碱存在的条件下,与乙醇反应,乙醇被氧化为乙醛,并可继续反应生成三氯乙醛和氯仿
氯仿:异戊醇=25:24:1在核酸抽提中用来除去蛋白和脂类物质,分液后水相(pH8.0,其中含核酸)在一定的离子强度下加入乙醇沉淀核酸,其中残留的有机溶剂会被乙醇带走。
酚抽提法得到的核酸质量能胜任大多数的分子生物学操作。在常用核酸分离方法中其核酸纯度仅次于氯化铯梯度离心法获得的核酸,比大多数的离子交换法得到的核酸质量要高。
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