核酸电泳怎么（核酸电泳怎么看结果）

1. 核酸电泳技术的目的
2. pcr电泳法
3. dna电泳电压和电流设置
4. 电泳胶板怎么做
5. 电泳的目的是什么

核酸电泳技术的目的

是利用不同长度的核酸在凝胶电泳中表现出不同的迁移率从而分离核酸。此外要注意的是核酸构象和单双链的不同也会影响其迁移率，要仔细辨别对待。

pcr电泳法

这个是分子生物学实验中的常规技术方法，PCR扩增产物一般为双链DNA片段，在加有TBE缓冲液的琼脂糖凝胶中DNA分子带负电荷，因此在电泳过程中DNA分子会从阴极向阳极泳动，分子量大的DNA分子会比分子量小的DNA分子移动速度慢，从而实现不同分子量DNA片段的分离，电泳结束后用特异性核酸染料溴化乙锭染色，在紫外光照射下显示不同的条带。

dna电泳电压和电流设置

看电泳槽多大，两电极直接的距离，每cm 3~5V。例如一个20cm的电泳槽，电压就应该设为60~100V间。电压大，速度就快。还要考虑DNA长度，小片段DNA适宜用比较低的电压。

DNA分子提取得到以后，需要通过电泳技术来检测其数量和质量。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来，按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术，已经发展成为一种分析鉴定DNA分子的重要实验手段。

电泳胶板怎么做

根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺，根据分离分子的分子量确定浓度；加水加热融化，装好梳齿，合适温度加入显色剂（或者跑完电泳染色），倒胶板。以下为琼脂糖凝胶电泳的操作：

1 选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路；

2 选择孔径大小合适的点样梳子，垂直架在电泳胶模的一端，使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm；

3 按待分离DNA，配制相应浓度琼脂糖，100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀；

4 用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好，防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时，加入6μl核酸染料，摇匀，轻轻倒入电泳胶模中，琼脂糖凝胶的厚度在3～5mm。倒胶时要避免产生气泡，若有气泡可用吸管小心吸去；

5 琼脂糖凝胶凝固后，在室温放置20min，小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板，保持点样孔的完好；

6 将电泳胶模放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1～2mm。如点样孔内有气泡，用吸管小心吸出，以免影响加样；

7 将10μl DNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以提高样品的密度，使样品均匀沉到样品孔内，还可以使样品带颜色，便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置；

8 用微量移液器将样品小心加入加样孔内，记录样品点样秩序；

9 盖上电泳槽，开启电源开关，最高电压不超过5V/cm（100～150V恒压电泳），使DNA从负极向正极移动；

电泳的目的是什么

琼脂糖凝胶具有网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。核酸分子在琼脂糖凝胶中电泳时，具有电荷效应和分子筛效应，泳动时受到阻力。

琼脂糖凝胶的浓度需要根据你的目的条带长度来调整，通常在浓度0.5~2%之间。低浓度胶用来进行大片段核酸电泳，高浓度胶用来进行小片段核酸分析。所以琼脂糖浓度影响核酸分子“跑”的速度。

在我们实验室，目的条带一般不超过1kb，我们用的是1%的胶。至于条带模糊不清，弥散，可能是以下原因1）电泳缓冲液多次使用后，离子浓度较低，pH值上升，缓冲性能下降，可能出现条带模糊和不规则迁移的现象。

2）加样量太多可能导致条带模糊，加样量太少则可能条带弱甚至缺失。

3）电压和温度过高，可能导致条带模糊或迁移。

4）样品中含盐太高和含杂志蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。

5）核酸染色剂的稳定性及用量问题。实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭（EB），染色效果好，稳定性差，有毒。在凝胶温度50~60℃时加EB。附之前实验的图，Marker特别淡是因为Marker时间太久了，条带有点模糊，后来换了新的缓冲液就好了很多。就酱，分子生物学研究狗一枚，欢迎探讨指正~

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